Диагностические исследования при антропозоонозных инфекциях (на примере туберкулеза крупного рогатого скота)

Туберкулез – широко распространенное инфекционное заболевание человека и жи-вотных, вызываемое микобактериями туберкулезного комплекса (Mycobacterium tubercu-losis complex – MTBC). От больных туберкулезом животных могут заражаться люди, для них наиболее опасны Mycobacterium bovis (микобактерии туберкулеза бычьего). От лю-дей, больных туберкулезом, микобактериями туберкулеза человека – Mycobacterium tu-berculosis может заражаться крупный рогатый скот. Диагноз на туберкулез у крупного ро-гатого скота ставят на основании результатов аллергических, патолого-анатомических, гистологических и бактериологических исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков.

На современном этапе обеспечение эпизоотического благополучия сельскохозяйственных организаций по туберкулезу крупного рогатого скота (КРС) является одной из актуальных задач ветеринарной науки и практики. В Российской Федерации мероприятия по профилактике туберкулеза и по борьбе с ним проводятся в соответствии с санитарными и ветеринарными правилами «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных», утвержденными Госкомсанэпиднадзором и Департаментом ветеринарии Минсельхоза России 18 июня 1996 года, и «Наставлением по диагностике туберкулеза животных», утвержденным Департаментом ветеринарии Минсельхоза России 18 ноября 2002 года [1]. Ключевым звеном в программе мероприятий по профилактике и ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота и по оздоровлению КРС служат «…систематические ди-агностические исследования животных, выделение из стад больных живот-ных или целых неблагополучных групп с последующим их убоем…» [4]. Диагноз «Туберкулез» устанавливается на основании результатов комплексных исследований (рис. 1)

tub-1
Рис. 1. Схема комплексных исследований крупного рогатого скота на туберкулез

Мониторинг эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в административно-территориальных субъектах осуществляется согласно пункту 1.3 раздела 1 «Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных» [4].

Прижизненная диагностика туберкулеза у крупного рогатого скота проводится аллергическим методом.
Аллергический метод – внутрикожная туберкулиновая проба с применением Пурифиед Протеин Дериватив – туберкулина (ППД-туберкулин) для млекопитающих. Туберкулин вводят крупному рогатому скоту в середину шеи (рис. 2). Учет и оценку реакции на введение туберкулина проводят через 72 часа. Животных считают положительно реагирующими на туберкулин при утолщении кожной складки на 3 мм и более. Толщину кожной складки в месте введения туберкулина измеряют кутиметром, а полученный показатель сравнивают с толщиной кожной складки рядом с местом введения препарата [3, 4].

tub-2.png
Рис. 2. Туберкулиновая проба у крупного рогатого скота [6]

Для дифференциации парааллергических реакций у крупного рогатого скота используется симультанная проба с одновременным применением двух туберкулинов – для млекопитающих и для птиц или туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ).

Симультанная проба проводится в том же порядке, что и туберкулиновая (рис. 3). Проба является групповой и дает возможность оценить ситуацию по туберкулезу лишь в целом по стаду или по группе (не менее 6 голов) обследуемых животных. Под достоверностью различия понимают такое различие в величине показателей интенсивности реакций на туберкулин и КАМ, которое дает возможность с уверенностью не менее чем на 95 % сделать заключение о состоянии по туберкулезу обследуемой группы животных [3].

tub-3
Рис. 3. Симультанная аллергическая проба с использованием ППД-туберкулина и комплексного аллергена из атипичных микобактерий [11]

Офтальмопроба на туберкулез (глазной метод туберкулинизации).
Туберкулин в количестве 3–5 капель наносится на конъюнктиву нижнего века или на поверхность роговицы глаза животного. Проводится офтальмопроба двукратно с 5–6-дневным интервалом [2, 4, 5]. Результаты офтальмопробы оценивают через 6, 9, 12 и 24 часа после первого и через 3, 6, 9 и 12 часов после повторного введения туберкулина. Реакция считается положительной, если образуется гнойный или слизисто-гнойный секрет, который накапливается в конъюнктивальном мешке или вытекает в виде шнура из внутреннего угла глаза. Кратковременная гиперемия слизистых оболочек глаза и слезотечение с образованием небольшого количества слизистого секрета рассматриваются как отрицательная реакция [3].

Факторы, обуславливающие проявление неспецифических реак-ций на туберкулин у КРС
В многочисленных исследованиях было показано, что проявления неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота обусловлены многочисленными факторами внешней среды и индивидуальными особенностями организма животного [2, 3, 5]. Неспецифические реакции подразделяются на две основные группы: парааллергические и псевдоаллергические (см. таблицу).

Причины возникновения неспецифических реакций у крупного рогатого скота на введение туберкулина

Неспецифическая реакция Фактор, обуславливающий проявление неспецифической реакции Особенности неспецифической реакции
Парааллергическая Атипичные (нетуберкулезные) виды микобактерий и их ассоциации.

Mycobacterium tuberculosis (микобактерии туберкулеза человека). Mycobacterium avium (микобактерии туберкулеза птичьего)

Непостоянство реакции на туберкулин.

Сенсибилизация организма животного сохраняется от 1 до 3 месяцев после инфицирования [5].

Выявление наибольшего количества животных с выраженными реакциями на КАМ

Псевдоаллергическая Наличие гельминтов (фасциол, дикроцелий, эхинококков).
Актиномикоз.
Микологические поражения легких.
Гнойные или гнойно-некротические процессы во внутренних органах.
Нарушения обмена веществ
В благополучных по туберкулезу стадах у отдельных животных регистрируется увеличение толщины кожной складки на месте введения туберкулина на 3–4 мм, признаки воспаления отсутствуют

Причиной возникновения неспецифических реакций у крупного рогатого скота на введение туберкулина могут служить:
1)несоблюдение трехнедельного интервала между туберкулинизацией и вакцинацией (в этот период происходит сенсибилизация организма, и здоровые животные дают положительную реакцию на туберкулин);
2)«человеческий фактор» (диагностические исследования про-водят профессионально не подготовленные лица; наруша-ется методика проведения туберкулинизации и т. д.).

Лабораторные методы диагностики туберкулеза КРС
К лабораторным методам диагностики туберкулеза относятся бакте-риологическое исследование, серологическое исследование и молеку-лярно-биологическое исследование.
Бактериологическое исследование проводится с целью выделения возбудителя туберкулеза (рис. 4).

Отбор проб биоматериалов для бактериологического исследования производят как от животных с клиническими признаками туберкулеза, так и от животных, вызывающих подозрение на туберкулез. Исследуют молоко, мокроту, мочу. От павших и убитых животных для исследования отбирают пораженные участки органов на границе со здоровой тканью и измененные лимфатические уз-лы.

tub-4.png
Рис. 4. Культура Mycobacterium bovis. Среда роста Гельберга [10]

При наличии характерных для туберкулеза изменений исследуются портальные, предлопаточные, надвыменные, поверхностные паховые лимфатические узлы и фрагменты внутренних органов – легких, печени, почек.

Бактериологическое исследование биоматериалов на туберкулез за-нимает срок до 3 месяцев. Заболевание животных туберкулезом считается установленным в случаях выделения микобактерий туберкулеза бычьего или человеческого из материала от убитых животных [3, 4, 8].

Серологическое исследование на туберкулез проводится в реакции связывания комплемента (РСК).
РСК применяется в двух вариантах:
1) для обнаружения в сыворотке больного животного специфических антител к возбудителю туберкулеза;
2) для выявления и идентификации в исследуемом материале антигена возбудителя туберкулеза.

Проводят серологическое исследование в сельскохозяйственной ор-ганизации в случаях, предусмотренных пунктом 2.7 раздела 2 «Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных», а именно «…в случаях выявления в благополучном по туберкулезу стаде (на ферме) крупного рогатого скота при плановом исследовании реагирующих на туберкулин животных…» [4].

Молекулярно-биологическое исследование на туберкулез.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является одним из высокочувствительных и специфичных методов диагностики туберкулеза. Чувствительность метода ПЦР – от 10 до 100 микроорганизмов в пробе (чувствительность микроскопического метода – от 103 до 105 микроорганизмов). В основе метода лежит амплификация специфических участков ДНК возбудителя, которые содержатся в исследуемой пробе. В настоящее время в лабораторной практике применяются тест-системы как для выявления ДНК конкретного вида, так и для дифференцирования видов, входящих в Mycobacterium tuberculosis complex: микобактерий человеческого вида (M. tuberculosis), бычьего вида (M. bovis) и вакцинного штамма микобактерий бычьего вида (M. bovis BCG). Для проведения анализа используют следующие образцы биопроб от крупного рогатого скота: цельную кровь, молоко, фарингеальные смывы, мочу, фекалии, носовую слизь и биопсийные материалы, в том числе лимфатические узлы [3].

Молекулярно-биологическое исследование позволяет значительно ускорить раннюю диагностику туберкулеза, дифференцировать пара- и псевдоаллергические реакции на туберкулин, снизить количество подозреваемых в заражении туберкулезом и подвергаемых диагностическому убою животных [4, 5].

Патолого-анатомические исследования
Для убоя с диагностической целью отбирают животных по результатам вышеизложенных методов исследования.
Патолого-анатомические изменения в организме больного туберкулезом животного зависят как от его возраста, так и от стадии инфекционного процесса.
В начальных стадиях инфекционного процесса туберкулы имеют вид серых полупрозрачных узелков размером от булавочной головки до чечевичного зерна. Затем они становятся мутными, приобретают бело-желтый цвет, заполняются некротизированной сухой творожистой массой. В легких туберкулезные очаги поражения чаще выделяются над плеврой по тупому краю органа (рис. 5).

tub-5.png
Рис. 5. Легкое крупного рогатого скота при туберкулезном поражении тканей [9]

Молочная железа, печень, селезенка и почки у крупного рогатого скота поражаются обычно при генерализованном процессе. «Жемчужница» (туберкулезное поражение серозных покровов) регистрируется с одновременным поражением паренхиматозных органов и региональных лимфатических узлов (рис. 6).

tub-6
Рис. 6. Туберкулезные поражения серозных покровов («жемчужница») и регионар-ных лимфатических узлов у теленка [7]

Гистологические исследования проводят для дифференциации туберкулезных патолого-анатомических изменений от сходных изменений, наблюдаемых при других заболеваниях, например для дифференциации от гранулем паразитарного и микотического происхождения. В положительных случаях в гистологических препаратах, окрашенных по Цилю – Нильсену, находят гранулемы с некротизированным центром, окруженные зоной эпителоидных, отдельных гигантских лимфоидных клеток и соединительно-тканной капсулой.

Вместо заключения
Осуществление плановых профилактических диагностических иссле-дований на туберкулез способствует снижению риска инфицирования людей туберкулезом, ограничению распространения возбудителя из очагов инфекции, раннему выявлению неблагополучных по туберкулезу населенных пунктов.

Авторы:
И. А. Шкуратова, доктор ветеринарных наук, профессор, главный научный сотрудник, директор ФГБНУ «Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт» (ФГБНУ «Уральский НИВИ»), Екатеринбург
А. П. Порываева, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник отдела мониторинга и прогнозирования инфекционных болезней ФГБНУ «Уральский НИВИ», Екатеринбург
А. С. Красноперов, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела экологии и незаразной патологии ФГБНУ «Уральский НИВИ», Екатеринбург
С. В. Малков, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник от-дела экологии и незаразной патологии ФГБНУ «Уральский НИВИ», Екатеринбург



Библиографические ссылки
1. Боровой В. Н. Эпизоотическая ситуация по основным заразным болезням животных в Российской Федерации /Департамент ветеринарии Минсельхоза России.
2. Воронин Е. С., Бессарабов Б. Ф., Вашутин А. А. Инфекционные болезни животных. М. : КолосС, 2007. 671 с.
3. Дифференциальная диагностика неспецифических реакций у крупного рогатого скота при диагностическом исследовании на туберкулез. Методические рекомендации / А. Т. Татарчук, Н. В. Чурина, Л. Н. Аристархова, А. А. Малыгина, О. В. Виноградо-ва, Т. В. Рыбакова. Екатеринбург : ИРА УТК, 2004. 24 с.
4. Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации ту-беркулеза животных. Утв. Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 29.12.1983 г.
5. Найманов А. Х., Гулюкин М. И. Микобактериальные инфекции крупного рогатого скота. М.: Зооветкнига, 2014. 235 с.
6. Оценка активности национального стандарта туберкулина для млекопитающих относительно первого международного стандарта туберкулина Bovine
7. Патоморфологические изменения в организме животных при туберкулезе https://studfiles.net/preview/2901312/page:2/ (дата обращения: (16.11.2017).
8. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.2.3114-13 «Профилактика туберкулеза». Зарегистр. в Минюсте России 06.05.2014 № 32182.
9. Туберкулез. URL: https://vetvo.ru/tuberkulez.html (дата обра-щения: 16.11.2017).
10. Туберкулез URL: https://nsau.edu.ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/micro/tuberk.htm (дата обращения: 16.11.2017).
11. Эпизоотология туберкулеза крупного рогатого скота URL: https://studfiles.net/preview/2901312/page:3/ (дата обращения: 15.11.2017).


Уралбиовет
Опубликовал Уралбиовет Апрель 4, 2018 14:21